在进行禽流感血凝抑制(HI)试验(微量法)时,如果抗原液的血凝试验终点滴度为1:256,则配制A单位抗原时,稀释倍数为。()

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血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验具体操作和结果判定程序如下：
（1）材料准备
a.96孔V型微量反应板，微量移液器（配有滴头）。b.配制阿氏（Alsevers）液、鸡血红细胞悬液。c.pH7.2的0.01摩尔/升磷酸盐缓冲液（PBS）。d.高致病性禽流感病毒血凝素分型抗原和标准分型血清以及阴性血清。
（2）操作方法
①血凝（HA）试验（微量法）
a.在微量反应板的1～12孔均加入0.025毫升PBS，换滴头。
b.吸取0.025毫升抗原加入第1孔，混匀。
c.从第1孔吸取0.025毫升抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025毫升加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025毫升弃之，换滴头。
d.每孔再加入0.025毫升PBS。
e.每孔均加入0.025毫升1%（V/V）鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。
f.振荡混匀，在室温（20～25℃）下静置40分钟后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下1小时）。对照孔红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。
g.结果判定。将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。完全血凝（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数代表一个血凝单位（HAU）。
②血凝抑制（HI）试验（微量法）
a.根据血凝试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1∶256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1∶64（256除以4）。
b.在微量反应板的1～11孔加入0.025毫升PBS，第12孔加入0.05毫升PBS。
c.吸取0.025毫升血清加入第1孔内，充分混匀后吸0.025毫升于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025毫升弃去。
d.1～11孔均加入含4HAU混匀的病毒抗原液0.025毫升，室温（约20℃）静置至少30分钟。
e.每孔加入0.025毫升的鸡红细胞悬液轻轻混匀，静置约40分钟（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件下1小时），对照红细胞将呈明显的纽扣状沉于孔底。
（3）结果判定
以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。
只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。HI价小于或等于3log2判定HI试验阴性；HI价等于4log2为阳性。

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