下列关于平板划线的操作中，错误的是( )

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平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌体数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。方法步骤：①右手持接种环，经火焰灭菌，待冷却后，挑取大肠杆菌（或葡萄球菌）培养物少许。②左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。③烧灼接种环，杀灭环上残留菌种，待冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。划线结束后，仍需要灼烧接种环，避免污染环境和感染操作者。④划线完毕，盖上平皿盖，底面向上，用标签或笔注明菌名、检验号码、接种者信息等，置37℃孵育培养二十四小时后观察结果。A、为避免温度过高杀死菌种，灼烧后的接种环必须冷却才能蘸取菌液，A正确；B、酒精灯火焰旁可形成无菌区，故蘸取菌液和划线都要在酒精灯火焰旁进行，B正确；C、划线时，不要将最后一区的划线与第一区的划线相连，C错误；D、划线结束后必须将接种环放在火焰上灼烧以杀灭接种环上的微生物，可避免污染环境和感染操作者，D正确。故选C。

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