1、基因工程至少需要三种工具:限制性核酸内切酶(限制酶)、DNA连接酶、运载体。其中限制酶和DNA连接酶的作用对象都是磷酸二酯键。2、DNA连接酶和DNA聚合酶的区别:①DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键,而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上,形成磷酸二酯键。②DNA连接酶是同时连接双链的切口,而DNA聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来。③DNA连接酶不需要模板,而DNA聚合酶需要模板。A、胰蛋白酶可以使动物组织分散成单个细胞,可以用来制备细胞悬浮液,胃蛋白酶最适pH值接近于2,呈酸性,而细胞培养液的pH值接近于中性,所以不能用胃蛋白酶处理,A错误;B、限制性核酸内切酶作用的是磷酸二酯键,B错误;C、DNA连接酶是将两个DNA片段进行连接,其发挥作用时不需要模板,C错误;D、DNA聚合酶和RNA聚合酶都能催化磷酸二酯键的形成,D正确。故选D。
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