PCR仪实质上是一台自动调控温度的仪器,它调控不同温度的目的是①95℃,使DNA分子变性,失去生物活性 ②95℃,使DNA分子变性,解开螺旋 ③55℃,使DNA分子开始复制、延伸 ④55℃,使DNA分子恢复双螺旋结构,恢复活性 ⑤72℃,使DNA分子开始复制、延伸 ⑥72℃,使DNA分子恢复双螺旋结构,恢复活性

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1是预变性，稍长时间的高温保证所有模板都变性为单链，供引物结合。

2/3/4就是变性、退火、延伸了，是PCR的核心部分，重复30次才能扩增。这三步看PCR的原理就知道了。

5是保证所有产物延伸完毕，故延伸时间稍长。

6是低温保存，hold 4度保证所有酶的活性很低，产物不会被降解或者发生别的反应。

模板的话，一般试验中total DNA用的多一点。其实纯模板还是total DNA对结果并没什么影响，顶多就是纯模板的话，PCR体系里模板量少加一点，total DNA的话就多加一点。只要引物正确温度正确，结果都是能做出来的。

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