下列有关平板划线法的操作错误的是( )。

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每次接种的前后，将微生物的接种环直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌， A正确；高温会将菌体杀死，所以灼烧后的接种环必须冷却后，才可以伸入菌液中蘸取一环液，否则会烧伤或烧死微生物，B正确；酒精灯火焰旁的杂菌比较少，所以沾取菌液和划线都要在火焰旁进行，以防止空气中的杂菌，C正确；划线时要避免最后一区的划线与第一区线连． 因为最后一区是细菌最稀少的，而第一区是细菌最致密的，如果连在一起会影响单个菌落的分离效果，D错误。

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