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PCR扩增时,引物的设计和退火温度的设定是非常重要的。下列有关叙述正确的是


A. 为方便构建重组质粒,在引物中需要增加适当的限制酶切位点
B. 设计引物时,若引物长度过短,则引物与模板链结合的特异性较差
C. 若退火温度过高,则会破坏引物与模板的碱基互补配对
D. 长度相同但GC含量高的引物需要设定的退火温度较低

所属分类: 生物 (免费栏目) 浏览量: 84 次


PCR全称为聚合酶链式反应,是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术,利用的原理是DNA复制,需要条件有模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶(Taq酶),过程包括:①高温变性:DNA解旋过程(PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶,高温条件下氢键可自动解开);②低温复性:引物结合到互补链DNA上;③中温延伸:合成子链。A. 获得目的基因后一般需要将目的基因连接到质粒上,在引物上加酶切位点可以使后续的连接过程简单、可控,A正确;B. 特异性一般通过引物长度和退火温度控制,若引物长度过短,则引物与模板链结合的特异性较差,B正确;C. 退火的目的是让引物与DNA模板靠碱基互补配对而形成部分双链,温度过高会使形成的部分双链不稳定,即“破坏引物与模板间的碱基对”,C正确;D. C-G间氢键比A-T之间多,在相对较高的温度下含CG数目较多时更容易成功,退火温度低会增加产物的不确定性,D错误。

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