A、获得纯净培养物的关键是无菌操作,防止外来杂菌入侵;A正确.
B、高温灭菌的目的是高温杀死一切微生物,包括芽孢和孢子;B正确.
C、划线分离菌落在培养基上的分布是不均匀的,在划线的最后区域可以得到的单菌落;C错误.
D、稀释涂布平板法易获得单菌落和计数活菌数目;D正确.
故应选C.
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