基因工程的工具:限制酶、DNA连接酶、运载体。PCR即多聚酶链式反应,原理是DNA双链的复制,需要耐高温的DNA聚合酶参与。天然的质粒、噬菌体和动植物病毒通常需要经过改造,加上启动子、标记基因等序列才可以用作运载体,A正确;PCR反应中两种引物的碱基序列没有关系,B错误;载体质粒通常采用抗生素抗性基因作为标记基因,利用含抗生素的培养基进行筛选,C正确; 目的基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能表达,启动子是RNA聚合酶识别的位点,D正确。故选B。
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