基因工程的核心步骤是

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（1）基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤；PCR技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，因此这一技术的原理是DNA双链的复制．
（2）植物组织培养的主要原理是植物细胞具有全能性，该过程是在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其经过脱分化产生愈伤组织，再再分化形成完整的植株的过程．
（3）克隆动物实际上是用核移植方法得到的动物，也就是将一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，最终发育为动物个体．
（4）生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，它遵循的基本原理有：物质循环再生原理、物种多样性原理、协调与平衡原理、整体性原理、系统学和工程学原理．
（5）A、基因工程产生的自然界原有的蛋白质，而蛋白质工程能制造出新的蛋白质，A错误；
B、动物细胞培养时通常需发添加血清或血浆，B正确；
C、动物胚胎移植时，通常要在体外培养到桑椹胚或囊胚，C错误；
D、DNA连接酶和DNA聚合酶不是同一种酶，D错误．
故答案为：
（1）基因表达载体的构建      DNA双链的复制
（2）全能性      无菌     脱分化
（3）核移植      卵母
（4）循环       物质循环再生原理、物种多样性原理、协调与平衡原理、整体性原理、系统学和工程学原理
（5）B

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